生殖支原体概述
国内学者对SP-4培养基进行了改进。赵继文等[4]利用改良的SP-4培养基成功地从性病和性乱人群中分离出Mg。初期生长时间在30天以上，平均37.83天，最长55天。
1.2组织细胞培养法可为支原体提供良好的类似体内的生长环境。早在20世纪60年代，Chanock等人[5]就报道了肺炎支原体(Mp)在组织和细胞中的生长。20世纪90年代，Jensen等人[3，6]开始尝试用细胞培养的方法增殖Mg，并在电镜下观察Mg侵入细胞的过程及其在细胞中的定位。在PCR的监控下，Jensec发现在11 PCR检测出MgDNA阳性的尿道样本中，有9个样本适应在Vero细胞磁头中增殖，经过多次传代后，转移到改良的Friis fF肉汤培养基中，有6个样本可以继续传代，最后在琼脂培养基中克隆出4个菌株。Jensen认为，细胞培养和繁殖的过程在分离和获得新的Mg菌株方面发挥了三种作用。一是使临床标本中的Mg逐渐适应在人工培养基中生长，二是增加支原体肉汤培养基中接种的支原体数量，三是提供持续的接种源。根据Mg的免疫学特性，建立了检测Mg抗体和检测鉴定Mg抗原的血清学方法。
Furr等[7]在1984中详细报道了检测Mg抗体的MIF技术。Moller等利用MIF对31的急性盆腔炎患者进行Mg抗体检测，发现其中约40%的患者在发病后一个月内抗体滴度发生4次及以上的变化。Taylor-Robinson等[9]报道间接MIF试验是检测NGU患者Mg抗体的敏感、特异和简单的方法。Jensen等用EIA检测有尿道炎症和无尿道炎症状的男性性病患者急性血样中的Mg抗体，发现反应性较弱，与Mp有广泛的交叉反应。
根据特异性抗体能阻止支原体生长代谢的特点，我们可以用已知的高价血进行祖先生长代谢抑制试验来鉴定支原体[11]。赵继文等人用MIT对分离的Mg株进行了鉴定。
支原体表面暴露的脂质相关膜蛋白(LAMPs)是种属特异性抗原，抗原性高，不同株支原体的LAMP抗体具有高度的种属特异性，与其他种属无交叉反应[12，13]。)因此，提取Mg的LAMp建立了检测Mg抗体的ELISA方法，可以消除Mg与Mp的交叉反应。DNA探针法和聚合酶链反应(PCR)法检测Mg克服了前两种检测方法的缺点，为研究Mg与疾病病因的关系提供了有力的手段。
3.1DNA探针技术1987 Hyman[14]用PUCB载体构建Mg基因文库，从中筛选特异性DNA探针。通过斑点杂交，可以检测出仅含0.1ng的特异性支原体DNA，即105CFU。
3.2聚合酶链反应(PCR)技术PCR是一种灵敏度高、特异性强、快速、简便的新型基因诊断技术。从65438到0990，PCR技术开始应用于医学分支领域。
早期的引物是参照细菌末端特异性粘附蛋白的DNA序列设计的。Palmer等在体外扩增了Mg粘附蛋白的部分核苷酸序列，3株Mg均出现37bp的DNA片段，证明PCR技术可以检测到10-15g的mg-DNA，其引物序列为:
mg 1:5 ' TGT CTA TGACCA GTA TGT AC3 '
Mg2:5“CTG CTT TGG TCA AGA CAT CA3”
1991年Jensen等人【16】根据Mg的粘附蛋白基因设计合成了以下几组引物:
mgPa-1 5 ' AGA TGA TGA AAC CCT AAC CCC TTG G3 '
mgPa-1 5'GAC卡特彼勒CAA GGT ATT TCT CAA CAG C3 '
mgPa-1 5 ' CCG AGG GGT TTT CCA TTT TTG C3 '
MgPa-1和MgPa-3成功扩增出Mg的281bpDNA片段，5个临床分离株扩增出相同的DNA片段，其他支原体和细菌均为阴性。以MgPa-2为探针，Southern eP印迹杂交扩增产物均为阳性，证明引物具有特异性，对* * *的检测减少了约50 Mg细胞。1993 Jensen等人[17]根据Mg粘膜蛋白基因设计了另一对引物，即:
针对mg粘附蛋白基因设计了另一对引物，即:
mgPa-476:5 ' ATG GCG AGC CTA TCT TTG ATC CTT TAA 3 '
mgPa-903:5 ' TTC ACC TCC CCA CTA CTG TCC TAA tgc 3 '
用于确认和补充引物MgPa-1和MgPa-3扩增的结果，扩增片段为453bp。发现这两对Mg粘附蛋白引物的敏感性完全相同。用此法检测99例尿道炎患者的尿拭子，结果17例Mg阳性，而培养法无一例阳性。
1994 Jensen[18]扩增Mg粘附蛋白的基因序列并测序。结果表明，Mg条件下的序列具有明显的异质性。因此，根据16SrRNA的基因序列，Jensen等学者设计了特异性PCR引物，以便检测临床样本中所有Mg的感染。
mg-1.5 ' GAA TGA CTC TAG CAG GCA ATG GCT G3 '
Mg-2，5 ' ATT TGC TGC TCA CTT TTA CAA GTT ggct 3 '
四份临床标本的实验结果表明，Mg粘附蛋白基因序列不同，但其165rRN基因序列100%同源。将两种引物组合进行PCR，在可疑阳性标本中可检出Mg基因小于10-50拷贝的Mg基因，即保证了以16SrRNA基因为靶基因的PCR体系。
赵继文等[19]用Palmer设计的引物扩增mg37bpDNA片段，在三个群体中检测到mg。结果显示，滥交人群阳性率为25.26%，性病人群阳性率为65438±02.33%，健康人群阳性率为3.85%。孔等[20]用Jensen设计的MgPa-1和MgPa-3扩增Mg281bpDNA片段。检测结果显示，性乱妇女中Mg检出率为65438±00.2%，性病患者中Mg检出率为4.0%。
在1998中，米黄祖等[2]报道了两种分别基于Mg粘附蛋白和16rRNA基因的巢式PCR检测技术。前者扩增出原Mg的374bpDNA片段，后者扩增出241bpDNA片段。巢式PCR不仅提高了灵敏度，而且由于使用了两对不同的引物，进一步提高了特性。用这些方法检测40例女性性病患者，检出12例Mg阳性，阳性率为30%，高于普通PCR。微生物感染诊断的“金标准”是培养法，但Mg培养成功率极低，需要进一步研究和改进，以促进Mg在其中生长。此外，在Mg的培养中引入细胞系可能是一种很好的方法，因此有必要加强这方面的探索和研究。由于支原体物种之间的交叉反应以及抗原和抗体的高纯度，免疫学检测方法在实际应用中受到限制。研究并建立一种快速、灵敏、特异的检测临床标本中Mg抗原的方法具有重要的实用价值。PCR是一种简单、直接的检测Mg的方法，正在被广泛应用。主要用于Mg感染或急性感染的早期诊断和各种人群Mg的流行病学研究。但需要注意的是:①临床样本中Mg含量低、DNA纯度不够、抑制剂过多、TaqDNA聚合酶活性低都会造成假阴性，模板DNA的提取技术有待进一步完善；②由于PCR的高灵敏度，在整个操作过程中应严格避免PCR产物的污染，以减少假阳性。