质粒提取试剂盒中p1 p2 p3有什么作用?
P1:葡萄糖防止悬浮的大肠杆菌快速沉积在试管底部;EDTA是Ca和Mg?二价金属离子螯合剂,主要目的是螯合二价金属离子,从而抑制脱氧核糖核酸酶的活性;可以加入RNA酶A来消化RNA。
P2:这一步是碱处理。其中NaOH主要用于溶解细胞,释放DNA,因为在强碱性的情况下,细胞膜已经从双层膜结构变成了微胶囊结构。SDS与NaOH结合的目的是增强NaOH的强碱性,SDS作为阴离子表面活性剂破坏脂双层膜。
P3:溶液III用于蛋白质沉淀和中和反应。其中醋酸钾形成PDS是为了让SDS中的钾离子取代钠离子,因为十二烷基硫酸钠遇到钾离子就变成了十二烷基硫酸钾,PDS不溶于水,同时一个SDS分子平均结合两个氨基酸,所以钾钠离子取代产生的大量沉淀自然沉淀了大部分蛋白质。
2M醋酸用于中和氢氧化钠。基因组DNA一旦断裂,只要是50-100 kb的片段,就没有办法被PDS * * * *沉淀,所以碱处理时间要短,不允许剧烈振荡,否则最终得到的质粒中总会有大量基因组DNA混入,琼脂糖电泳可以观察到一条粗的总DNA带。
75%酒精主要用于净盐和抑制脱氧核糖核酸酶;;同时,溶液III的强酸性也是为了让DNA更好的与硅酸盐纤维膜结合。
扩展数据
质粒具有自我复制的能力,使其在子细胞中保持恒定的拷贝数,并表达其携带的遗传信息。细菌质粒是DNA重组技术中常用的载体。载体是通过基因工程手段将有用的外源基因送入受体细胞进行增殖和表达的工具。
将某一目的基因片段重组到质粒中构成重组基因或重组体。然后通过微生物转化技术将重组体转化到受体细胞(如大肠杆菌)中,使重组体中的目的基因在受体细菌中繁殖或表达,从而改变宿主细胞原有的特性或产生新的物质。
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