如何进行银杏的组织培养?
现在已经做的组织培养实验主要有茎尖培养和幼胚培养。
茎尖培养时,应从待繁殖的银杏植株中上部采集长枝,剪去叶片和叶柄,用湿润的纱布包好带回室内,依次用蒸馏水、漂白粉溶液、蒸馏水、升汞水、蒸馏水反复冲洗。然后在无菌条件下,切下长约0.5厘米的茎尖,最后将茎尖接种在准备好的培养基上,盖上管口,防止污染。用于组织培养的芽尖可以是顶芽或侧芽。考虑到银杏树的组织具有明显的立地效应,一般不适宜采集向外延伸的侧枝芽作为组织培养材料。
一般用于茎尖培养的培养基是改良的白色培养基诱导愈伤组织和胚茎,N6基生根培养基用于促进生根。
改良白色培养基的组成为:白色培养基+BA 0.5-1.0+NAA 0.5+NH4Cl 5.34+糖4%。
生根培养基的组成为N6+2,4-D3+Ba1+NAA1+3%糖+0.5g琼脂。
(以上浓度单位,除糖琼脂外,均为毫克每升溶液。)
培养条件为:温度25-29℃。首先进行一周的暗培养,形成愈伤组织。从第八天开始,转移到自然散射光下,再培养一周,促进胚胎干的分化。这时可以看到两种叶芽。一个是群居的,一个是独居的。选择由独立芽形成的茎段,转移到生根培养基上进行继代培养。三周后,根系可以逐渐生长,形成完整的银杏植株。
试验表明,银杏茎尖组织在添加NH4Cl代替2,4-D的白色培养基上的芽诱导率为83.65438±0%,有时甚至能诱导生根。
幼胚培养主要用于挽救一些未完全成熟或因其他原因不能长成新植株的杂种胚或异常胚,有利于新基因型后代的保存。
具体方法如下:首先将银杏的种皮从骨头上去掉,用70%的酒精对种仁(这里实际上是胚乳)消毒2-3分钟,然后放入0.1%氯化汞水溶液中20分钟,再用无菌水冲洗3次。在无菌条件下挑出种子胚,然后将胚切成整块或几块,用灭菌滤纸吸干水分,再分别接种在试管内的琼脂培养基表面。
作为幼胚培养的培养基,N6和MS是有利于愈伤组织形成的基本培养基。10-15天后,胚轴切口处会形成芽。三种常用芽接介质的组成是:
N6+KT1+NAA1+ 3%糖+0.5%琼脂。
MS+BA3+NAA0.5+糖3%+琼脂0.5%
Ms+2,4-D2+IH300+3%糖+0.5%琼脂。
将带芽的胚培养块转移到白色+2,4-D2+NH4Cl 5.34+IH 300+糖4%+活性炭0.05%+琼脂0.5%的培养基中,经过6-10天,即可从芽中长出根,形成完整的小植株。
具体培养条件为:温度保持在25℃左右,上下不超过2℃。分化培养阶段,白天用40瓦荧光灯照射10小时,晚上保持黑暗。当幼苗长出4-7片叶子时,切成2-3段,按时间顺序培养,出芽后转接到生根培养基上。
中国科学院植物研究所等。,用蜂乳作培养基培养银杏幼胚,也取得了成功。可见,只要有合适的激素和细胞分裂增殖所必需的营养物质,银杏胚的正常发育是可以得到保证的。