细胞培养的生长条件是什么？

1.所有与细胞接触的设备、装置和溶液必须保持绝对无菌，以避免被细胞外微生物污染。

目前最可靠、最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。

如:玻璃制品、布制品、金属制品:6.8kg20min。

橡胶制品:3.6 ~ 4.5公斤10分钟。

培养液，如汉克斯液，水解乳蛋白:3.6 ~ 4.5 kg 10 min。

实验中受感染的物品和动物尸体:20min 6.8kg。

试管、吸管等。，可以干热灭菌；

所有不适合加热灭菌的液体，如合成培养液、小牛血清、胰蛋白酶等溶液，均可过滤灭菌。

细胞培养中常用消毒剂的浓度及其应用场合

2.必须有充足的营养供给，绝对不能有有害物质，包括极微量的有害离子。因此，必须注意设备的清洁和配液用水的质量。

细胞培养对水的质量要求很高(见水处理)。

3.保证适量的氧气供应。

细胞代谢需要空气，否则细胞会死亡。在培养瓶中进行静态培养或在旋转瓶中进行旋转培养时，只要培养液的量不超过总容量的30%，就可以通过在液面与空气进行交换来保证细胞有足够的氧气。当在罐中进行深层培养时，通风是必要的。通常使用含5% CO2的空气，或者根据需要将CO2、N2、O2和空气以不同的比例混合。氧气过多也不利于细胞的生长。

4.细胞代谢中产生的有害产物要随时清除。

在代谢过程中，细胞会产生大量的代谢废物，如CO2、乳酸、氨、尿素、吲哚等。这些产物对细胞的生存有害，必须及时清除。在少量培养中，当培养基中的酚红指示剂呈黄色时，说明已经产生了相当数量的乳酸，需要及时更换新鲜培养基。在大规模培养中，需要随时测定葡萄糖和乳酸的含量，调整灌注速度，使代谢产物保持在无害的水平。

5.有良好的适合其生存的外部环境，包括温度、酸碱度、渗透压和离子浓度。

不同的细胞对pH的要求不同，一般来说，适合细胞生长的pH为6.8 ~ 7.4。过高或过低都不利于细胞生长。如上所述，细胞在代谢过程中会产生大量的乳酸，使培养物的pH值降低。为了维持培养基的pH值，常常在培养基中加入各种缓冲体系，如Na2HPO4/Na2HPO4、NaHCO3/H2CO3(CO2)、三甘氨酸、Hepes溶液(常用浓度为10 ~ 50mol/L)。

6.及时接种以保持适当的细胞密度(见细胞传代)。

第二，细胞分离

1.人白细胞的分离。

常用于制备IFN-α和γ。

主要来源于献血者的静脉血，也来源于体外循环时的残血、分娩时的脐带血、脾脏和扁桃体。

2.人胚胎肌层细胞的分离。用于制备干扰素-β。

3.体外细胞年龄的计算

二倍体细胞年龄的计算是将细胞群体加倍，以每个培养容器细胞群体中的细胞数为基础，每加倍一次视为一代，即1瓶细胞转移到2瓶(1: 2种子率)后满瓶视为一代；1瓶到4瓶(1: 4)是第二代；1瓶和8瓶(1: 8)是三代。生产细胞的年龄限于细胞寿命的前2/3。

传代细胞系以一定的稀释倍数传代，每次传代为一代。根据各细胞系的实际经验数据，保证细胞的质量和安全，确定生产和使用的最后限制代细胞。

四。细胞识别试验

新建立的细胞系或品系、细胞库和生产末期的细胞应被鉴定为该细胞。可采用遗传特征、DNA指纹、染色体标记、免疫学、HLA和生化方法(如同工酶)进行判定，可选择其中任何一种。也可以采用简单、可鉴别的方法，但需经国家药品检验机构批准。

人二倍体细胞系来源于正常人胎肺或其他组织，主要用于培养病毒和制备疫苗。

1.细胞株要求

人类二倍体细胞系应按照以下要求进行全面检测。

(1)细胞系的建立必须具备以下信息

用于建立细胞系的胎儿的胎龄和性别，以及终止妊娠的原因。

用于建立细胞系的胎儿父母的年龄、职业和健康状况(由医生证明)，胎儿父母三代应无明显遗传缺陷史。在提取胎儿组织前，应进行详细的调查。

原始组织的类型，原始细胞培养的细胞数量和生长状态。

细胞培养方法、历史、生长特性和世代寿命。

细胞生长液的成分。