细菌学检验有哪些应用？
近年来，随着恶性肿瘤的高发、艾滋病的流行、化疗药物、广谱抗生素、糖皮质激素和免疫抑制剂的广泛使用，以及人工导管、器官移植等有创诊疗技术的应用，真菌引起的感染日益成为临床科室面临的巨大挑战。
为了提高临床诊断水平，加强真菌检验能力非常重要。现将临床微生物实验室真菌检验的常见问题总结如下，供大家参考。
1.为什么要把培养设定在35℃呢？
为了防止温度波动对细菌或真菌生长的影响，实验室通常将培养箱温度设定为35℃。临床常见细菌的最适生长温度为33~37℃(嗜热菌和中温菌除外，占少数)。设定在35℃时，不会因为波动2℃而影响培养。如果设置在37℃的话，显然是不合适的。至于真菌培养，要看标本来源。
对疑似浅部真菌感染的皮屑、指甲屑、头皮屑和头发等标本进行分离培养，培养温度为26~28℃。来自人体深部组织的标本，如痰液、胸腔积液、血液、骨髓深部脓肿等，建议在更接近人体体温的35℃培养。其次，最常见的临床白色念珠菌在35℃下可形成较为典型的假鬼臼菌落，与35℃血清发芽试验相同。
同时，在35℃下分离的光滑假丝酵母具有较高的酶活。怀疑温度型双相真菌感染或单个真菌需要在较高温度下生长，两种温度需要同时培养。还要注意培养环境的湿度，一般要求大于60%。如果培养箱的湿度不够，最好在平板附近放置装有无菌水的容器，以保证湿度。
2.CO2对真菌的生长影响大吗？
真菌属于异养微生物，主要从有机物中获取碳源，而自养微生物只需要从CO2中获取碳源，所以真菌一般不需要在二氧化碳环境中培养，CO2不利于真菌的生长繁殖，但一定浓度可以刺激孢子形成。
3.血培养两次培养出真菌，但患儿无临床表现，临床未使用抗真菌药物，患儿情况良好。污染是个问题吗？
这种情况下需要判断是否是污染菌，调查采血流程是否规范，血瓶转移流程是否符合要求，针孔是否密封良好，转移盒是否被污染等诸多因素。最重要的是患者的临床表现。如果没有真菌感染的症状，应该考虑污染或定植(不太可能)。
4.在我们基层医院的实际工作中，阴道分泌物真菌培养几乎无法进行生化鉴定，很多人直接报告白色念珠菌。这样合适吗？
这是不合适的。现在有的检验科连酵母菌和霉菌都分不清，在显微镜下发现阴道分泌物、尿液、粪便中有念珠菌后就报告为“发现霉菌”。
霉菌是指丝状多细胞真菌；酵母指的是单细胞真菌，两者不能混为一谈。阴道内感染的酵母菌多为白色念珠菌，但也不排除其他酵母菌。
藏红花念珠菌对氟康唑和5-氟胞嘧啶有天然耐药性。如果遇到自然耐药的类似菌株，会影响后续治疗。
5.痰标本中有少量念珠菌需要在报告中反映吗？还不举报？
标本要求和检查程序要有所体现，临床医生会综合考虑。虽然白色念珠菌引起肺部真菌感染的概率很小，但建议临床医生结合影像学结果报告和考虑该真菌。
晚期痰标本要直接涂片。如果标本质量合格，如果在痰培养中见到真菌丝、假菌丝或大量孢子、真菌生长，应向临床医生报告，由临床医生综合考虑。至于要不要做药敏，可以和医生沟通后再决定。
①留样前建议用5%苏打水漱口；
②早晨第一次痰；
③发送3d图像的结果是否一致。
最好能和临床医生交流，或者平时对医生护士进行标本采集方法的培训。报告前，结合痰涂片镜检结果，注意标本的质量信息和污染的可能性。
6.请问:前几天偶然发现一个提取的脓液标本，血培养抓到的。阳性报告后，涂片显示真菌孢子。转移后涂片呈圆形，墨汁染色阳性，但无包膜。转完之后的柯玛佳已经没有颜色了，白的有点黄。这表明它几乎是光滑的和药物敏感的。问题是:①这个结果可信吗？②墨水是不是普通果汁有关系吗？③如何提高？
墨汁染色是对标本中隐球菌特别是新生隐球菌的荚膜进行的阴性染色试验，不能作为纯培养隐球菌的鉴别试验。
(1)对之前的脓液标本做10%KOH湿活检，寻找真菌孢子和真假菌丝。
(2)培养结果要可信，最好与临床医生沟通，看患者是否有症状。
(3)对某国产品牌不熟悉，鉴定结果和药敏结果难以判断。
(4)按照国家操作规程，准备了鉴定念珠菌的生化管，原卫生部控制的真菌鉴定符合率还是很好的。可以考虑自己做生化管，用质控菌做验证。
(5)用每个批号验证一个国产鉴定管的质控菌，如果结果一致，应该没有问题。
(6)最好参加原卫生部的微生物质控培训，这有助于你提高业务水平，验证你所用试剂的质量，无论细菌还是酵母。
(7)只要油墨粗细均匀，颗粒越细越好。推荐曹素功墨水，印度墨水可以到试剂公司购买。
7.在常见的临床痰标本中首次检出曲霉菌后，该过程是如何进行的？
(1)首次从痰标本中培养出丝状真菌菌落，前提是痰标本新鲜或不能立即送检，应保存在4℃冰箱中。
流程是痰标本验收→镜检→培养→鉴定。
痰标本合格后，先做10%KOH湿膜镜检，低倍镜下寻找真菌菌丝，是否透明或深色，是否有45度分支。
如果痰标本合格，发现菌丝，电话联系门诊，告诉医生有丝状真菌生长，怀疑是XXXX。直接向临床报告容易，种植夏克琼脂平板或查兹琼脂平板，然后进行进展鉴定就难了。
(2)如果标本不合格或合格，但标本中未发现菌丝，与临床医生电话沟通，告知有真菌生长，以便医生综合考虑。鉴定正常进行，诊所上报。这番话不排除污染的可能。
8.酵母同化试验为什么把28℃而不是35C？同化试验和发酵试验有什么区别？为什么教科书上说任何能发酵某种糖的人都必须同化它，而同化某种糖却不一定能发酵？
大多数酵母的体外最适生长温度为28-30℃，因此选择该温度进行体外实验。转化和发酵分别指真菌的有氧呼吸和无氧糖酵解。前者将糖分解成二氧化碳和水，后者将糖分解成二氧化碳和酒精。
它的代谢首先是有氧呼吸获得能量，然后是无氧糖酵解，这是由细菌和真菌的相关酶决定的。大多数酵母是专性需氧细菌，因此实验设计主要基于糖同化试验。比如隐球菌只能有氧呼吸，所以只能同化葡萄糖不能发酵，而酿酒酵母可以把粮食发酵成酒，既发酵又同化葡萄糖。
9.针对目前真菌培养不是很规范的情况，如何选择培养基、温度、报告时间和方法？请描述一下实验室的具体流程。
(1)培养基:谢赫氏葡萄糖琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂、脑心提取物琼脂等适合真菌生长的培养基。临床上怀疑是酵母菌和酵母样细菌感染。如果条件允许，实验室可以平行接种显色培养基。推荐采用螺旋管斜面培养法，标本经处理后接种于培养基斜面的中下部。对于大多数需氧菌，建议平行接种两管。
(2)培养条件和报告时间:深层真菌应在28±65438±0℃培养7 ~ 65438±04d。如怀疑双相真菌感染，应在65438±0℃同时进行28℃和35℃培养。
若怀疑罕见真菌感染生长缓慢的真菌或已使用临床抗真菌药物，观察时间应延长至少4周。
例如，脑脊液应在28℃和35℃培养至少一周；
痰/尿/粪一般可35℃48h。如果没有丝状真菌生长，培养时间会延长。
组织标本通常在30℃保存2~4周。
10.科马佳显色培养基可以作为真菌的原代培养基吗？
作为原代培养基之一，建议接种沙氏培养基或酵母氮培养基(YPDA)。SDA和YPDA通常是酵母样细菌的标准培养基。
11.咽拭子培养真菌有意义吗？
用咽拭子培养真菌意义不大，除非患者有临床表现，否则存在定植。
12，想问一下痰标本念珠菌定植率这么高，痰涂片中孢子和假菌丝多怎么报？
个人认为还是要如实向临床医生汇报，告知临床医生标本质量是否合格。至于是否感染，临床医生会根据影像学资料和患者的临床表现综合考虑。
13.患者手上出现湿疹样丘疹，疑似真菌感染。我如何能取样？
对于皮损的采集，需要先用70%的酒精对患处进行消毒，然后用已消毒的不锈钢刮刀或手术刀刮去皮损边缘的皮屑，放入无菌容器中进行检查。
14，SDA片可以用一次性手套吗？
一次性手套，无论是PV还是乳胶，都会产生相对低氧的环境，而真菌是好氧菌，会影响真菌的生长。不建议执行此操作。
可以用透气胶带(静脉输液固定针头用)把平板封好，注意不要封的太紧。
15，用的墨水在显微镜下不是均匀的黑色背景，而是一些黑色小颗粒。这是墨水质量差吗？还有，生物安全柜、洁净工作台柜、通风柜有什么区别？
墨水本身是在溶剂中加入一些微小的颗粒而形成的，墨水的质量在于颗粒的大小和均匀性。
一般墨水检测隐球菌时应该可以观察到，它只是作为背景，胶囊是不染色的，透明的，而背景是黑色的。
生物安全柜和洁净工作台的区别在于风吹的方向:
生物安全柜的风向先垂直向下，再进入柜内，经HEPA过滤循环后排出，在柜内形成一个相对负压的环境；
洁净工作台的风向是先向下再向外吹，以保证柜内的清洁无尘，通常用于配置平板，操作一些简单的分子克隆相关实验。
通风柜通过风机将柜内空气排到实验室外，风机通常用于配置挥发性化学试剂，将有害气体排到室外。
16.痰涂片中看到曲霉菌头有什么临床意义？有没有被毛霉污染的可能？还是固定值？痰中检出了青霉菌，是不是没有意义？
如果直接镜检痰标本发现曲霉菌头，应考虑曲霉菌感染。培养可以确定是哪种曲霉菌。
毛霉有污染的可能，也可以存在于空气中。但由于其侵入性较高，报告需谨慎，设定定值的可能性很小，但操作中仍有很多污染的案例。如果标本合格，且湿膜镜检有90度分支和粗大、不分裂的菌丝，应考虑，否则有污染的可能，最好及时联系临床医生。
青霉菌是一种条件致病真菌。如果显微镜直接在痰中检测到菌丝，培养阳性，应考虑感染。
17.在经验积累的初级阶段，如何获得足够的菌种来练习各种染色和读片？
有条件的话，最好去相关医院的真菌室做进一步的湿镜检查和真菌鉴定。将保存的菌种分批转移后，仔细研究菌落颜色、大小、质地和镜检的变化，并做好记录。或者参加医学真菌专业培训班进行系统学习。
18，真菌菌种如何保存？
最好的方法是真空干燥和低温冷冻。这种方法被国际菌种保藏机构所采用。
(1)将生长斜面直接冷冻在-10℃，不适合皮肤癣菌和许多接合菌菌种的保存。
(2)蒸馏水保存法:将生长在马铃薯葡萄糖培养基上的成熟菌落的菌丝体、孢子或酵母细胞刮下或用无菌蒸馏水冲洗斜面，然后用吸管吸出并置于无菌小管中，密封防止蒸发，室温保存。
(3)另一种方法是在霉菌生长的琼脂斜面上直接加入无菌矿物油，至少可以保存半年。
(4)在基础液体培养基中加入15%~30%甘油，挑取新鲜成熟菌落，于-80℃保存。
19，是否是真菌感染我们会重点关注什么样的患者？
免疫缺陷患者、器官移植患者、肿瘤患者、中性粒细胞减少患者以及长期使用广谱抗生素的患者。
20.霉菌培养箱(28C)被污染后怎么办？污染的细菌在培养基放入培养箱后生长很快，特别是在门上的密封条上。我该怎么办？
停电后甲醛熏蒸，用5%苯酚(石炭酸)擦拭30分钟，清水擦拭，开通风24小时后使用。
21.血培养可能培养出什么丝状真菌？什么是污染？
血培养阳性的丝状真菌主要有组织胞浆菌、马尔尼菲蓝细菌、镰孢菌属、念珠菌属、隐球菌属、毛孢子菌属和赛多孢菌属。在人眼球组织中培养紫色拟青霉(磨碎并放入血培养瓶中)。将腹水泵入血培养瓶中培养布朗腐霉。
文献报道皮炎芽生菌、Aemon和球虫病都可以从血培养中培养出来。
烟曲霉被污染，有报道从心内膜炎患者外周血培养出土曲霉[I Clin microbiol . 1998 nov；36(11):3347-51]。
22.呼吸道患者1例，男，61岁，诊断为支气管肺炎，HIⅳ阴性，合格痰培养出蓝细菌马尔尼菲3+。能确诊吗？有必要复检吗？
他肝脾大吗？有没有骨骼受累？皮肤受累还有？还是仅仅局限在肺部？病人有其他潜在疾病吗？
建议标本再送一次，如果蓝蓝马尔尼菲反复培养你要警惕。痰中培养出马尔尼菲青霉菌，应考虑为致病真菌。
蓝细菌马尔尼菲和曲霉菌的区别；
如果在直接临床标本(体内)中，蓝细菌马尔尼菲是一种酵母样孢子，而曲霉菌是一种分枝呈45度角分开的菌丝体。
如蓝细菌马尔尼菲在体外28℃培养可呈淡黄色、黄绿色，背部红色，红色色素渗透培养基；
曲霉菌一开始是白色的，表面可以是不同颜色的颗粒，以此来区分哪个是曲霉菌。
蓝木耳马尔尼菲能看到扫帚枝，曲霉菌能看到曲霉菌的头。
以上内容来源:卢洪洲、钱学勤、徐和平主编的《药用真菌检查与图解》。
求收藏
求点击
乞求看到